Kaedah untuk sintesis kimia peptida termasuk larutan-sintesis peptida fasa dan sintesis peptida fasa pepejal-. Sintesis peptida fasa penyelesaian{3}}melibatkan gandingan asid amino dalam larutan; ia biasanya berjalan dalam arah terminal C-ke terminal N-dan sesuai untuk sintesis peptida pendek (cth, yang mengandungi kurang daripada 10 asid amino). Strategi perlindungan yang biasa digunakan termasuk kaedah BOC (tert-butyloxycarbonyl) dan Z (benzyloxycarbonyl). Pendekatan ini menawarkan kelebihan seperti kos yang lebih rendah dan kemudahan skala{12}}naik, walaupun ia memerlukan penulenan produk perantaraan. Reagen gandingan utama yang digunakan adalah daripada jenis carbodiimide (cth, DCC); bagaimanapun, ini boleh menyebabkan tindak balas sampingan pelumbaan, yang boleh ditindas melalui penambahan bahan tambahan seperti HOBt.
Prinsip asas sintesis peptida fasa pepejal-melibatkan melumpuhkan-asid amino terminal C rantai peptida pada sokongan pepejal (seperti resin). Rantaian peptida kemudiannya dipanjangkan secara progresif melalui satu siri langkah berulang yang melibatkan penyahlindungan, pengaktifan dan gandingan; arah sintesis secara amnya bermula dari terminal C-ke terminal N-. Strategi perlindungan utama yang digunakan ialah kaedah BOC (tert-butyloxycarbonyl) dan Fmoc (9-fluorenylmethyloxycarbonyl), dengan kaedah Fmoc telah muncul sebagai pendekatan dominan kerana keadaan tindak balasnya yang sederhana. Reagen gandingan yang biasa digunakan termasuk kedua-dua jenis reagen-karbodiimida (cth, DCC) dan garam onium (cth, HBTU). Selepas sintesis, peptida mesti dibelah-biasanya menggunakan reagen seperti TFA atau HF-untuk mencairkannya daripada sokongan resin.
Pemilihan kaedah sintesis peptida adalah bergantung pada panjang rantai peptida dan ciri khusus jujukannya: sintesis fasa pepejal-menawarkan kecekapan tinggi dan mudah menerima automasi, menjadikannya sangat-sesuai untuk sintesis peptida sederhana-panjang (cth, lebih kurang 30 asid amino); sebaliknya, sintesis fasa penyelesaian-lebih sesuai untuk penghasilan peptida pendek. Untuk peptida "sukar"-seperti jujukan yang terdedah kepada pengagregatan atau yang mengandungi asid amino khusus-strategi alternatif, seperti kaedah pseudoproline atau kaedah perlindungan jenis *ortho*-hydroxybenzyl-boleh digunakan.